荧光强度容易受外界因素的影响，如样品池、激发光源、温度、溶液的pH值、溶剂性质、其它溶质、表面活性剂等都会造成荧光强度的变化。严格控制测试条件对荧光分析来说至关重要。
①样品应盛在四面透光的石英比色皿（荧光池）中，如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。
②在荧光分析时，为了得到稳定可靠的数据，一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯，预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质，尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。
③温度变化可引起荧光强度的改变。通常降低温度，有利于提高荧光量子产率，荧光强度增大。温度影响荧光强度的显著程度因样品而异，大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大，测试温度变化不超过±3℃，对测试结果几乎无影响。
④当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中，分子和离子的电离平衡会发生改变，而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。以苯胺为例：在pH=7～12的溶液中会产生蓝色荧光，在pH<2或ph>13的溶液中都不产生荧光。再如，维生素B2（核黄素）在430～440nm蓝光照射下会发出绿色荧光，λem为535nm。它在pH=6～7的溶液中荧光强度大，而在pH=11时荧光消失；但在碱性溶液经光线照射发生分解作用或在酸性KMn04氧化下都会生成荧光强度比维生素B2强得多的黄光素，并可溶于。利用此性质可提高测定的灵敏度和选择性。
⑤分子结构中存在π-π共轭的荧光物质在极性溶剂中，荧光效率显著增强。溶液中表面活性剂的加入能够显著提高荧光强度。
